Resumen

Introducción. La información obtenida de estudios ultraestructurales depende entre otros aspectos del tipo de fijación y por lo tanto del nivel de conservación de las estructuras evaluadas. En el caso de la pared bacteriana el empleo de lisina y rojo de rutenio mejoran la visualización de sus componentes y permiten una imagen más contrastada que la obtenida mediante métodos de fijación clásicos. Material y métodos. Se empleó la cepa ATCC 27853. De pseudomonas aeruginosa para evaluar dos protocolos de fijación para microscopia electrónica de transmisión. El método estándar, consistente en una fijación secuencial, primero con glutaraldehido (GA) al 2,5% en amortiguador de fosfatos por 2 horas y luego con tetraóxido de osmio (Os O ₄ ) al 1% por una hora, ambos fijadores en amortiguador de fosfatos (pH 7.2). El otro método de fijación consistió en una fijación inicial con una mezcla de GA al 2.5%, rojo de rutenio al 0.075% y lisina 50 mM en amortiguador de cacodilato. Luego se fijó nuevamente durante 100 minutos con una solución de glutaraldehido, rojo de rutenio y cacodilato (0.1 mM pH 7.2) y posteriormente se fijó con Os O 4 durante una hora. Ambas preparaciones se deshidrataron, embebieron en resina, se cortaron en un ultramicrótomo y analizaron al microscopio electrónico de transmisión. Resultados. En las preparaciones obtenidas por el método estándar se aprecia la estructura de la pared propia de los organismos Gram negativos, sin embargo, el material exterior a la pared no se visualiza fácilmente. Por el contrario, en la fijación a prueba se aprecia una imagen más contrastada, lo que facilita la identificación de los diversos elementos de la pared y se aprecia fácilmente el exterior a la pared. Discusión. El método evaluado facilita la observación del glicocálix, que aparece como un material electrodenso irregular, localizado en la parte externa de la pared bacteriana. Por lo tanto, se propone el empleo de esta fijación para el análisis ultraestructural de glicocálix.

Palabras clave: Ultraestructura pared celular bacteriana rojo de rutenio glicocálix.

2004-03-09   |   2,324 visitas   |   Evalua este artículo 0 valoraciones

Vol. 9 Núm.1. Enero-Marzo 1998 Pags. 7-11. Rev Biomed 1998; 9(1)